快速检测新航标，独家原始基因编辑酶系列产品， CbAgo酶、Pf Ago酶 和 Cas12a酶！ 基于引物交换反应介导的葡萄簇状荧光聚苯乙烯点的免扩增数字测定法可检测多种病原菌
快速检测新航标！！！独家原始基因编辑酶系列产品—— CbAgo酶、Pf Ago酶 和 Cas12a酶，利用该系列酶研究人员在Nature Food (23.5), ACS Nano (16.2)，Nano Lett (10.1), Chem. Eng. J. (13.3), Food Chem. (8.5), Anal. Chem. (6.7)等杂志上已累计发表15篇中科院一区SCI论文。欢迎感兴趣科研工作者以及试剂盒检测开发等同行咨询订购
此文转载于科学私享https://doi.org/10.1021/acsnano.4c09069
2024年11月1日，华中农业大学/大连工业大学陈翊平教授团队在国际Top期刊《ACS Nano》（Q1，IF=15.8）发表题为“An Amplification-Free Digital Assay Based on Primer Exchange Reaction-Mediated Botryoidal-Like Fluorescent Polystyrene Dots to Detect Multiple Pathogenic Bacteria”的研究性论文。该文通讯作者为华中农业大学/大连工业大学陈翊平教授。该文第一通讯单位为华中农业大学。
成果介绍
病原菌的多重超灵敏检测至关重要，但仍是一项挑战。该研究团队介绍了一种利用葡萄簇状荧光聚苯乙烯点（PS-dots）对病原菌进行多重和靶向DNA-无扩增检测的数字检测方法，PS-dots 首先是通过引物交换反应链与聚苯乙烯纳米球之间的杂交反应制备而成，而聚苯乙烯纳米球则包裹了用于信号预扩增的聚合物点。
病原菌的 DNA 通过Argonaute（Ago）介导的多重精确裂解反应进行裂解，获得的靶向序列通过杂交反应桥接在磁珠（MB）和葡萄簇状 PS 点上，荧光 MB-葡萄簇状 PS 点复合物被用作基于颜色和大小的数字探针，进行数字编码。人工智能荧光微球计数算法用于识别和计数荧光 MB，以进行数字读出。
这种数字检测方法结合了超亮的葡萄簇状PS 点和 丁酸梭菌Ago 的精准酶裂解特性，在 1.5 小时内实现了对三种病原菌的同时检测，线性范围从102到106 CFU/mL，且无需靶向 DNA 扩增。这种数字检测方法还被应用于水产和临床样本的检测，准确率达到 98%，为下一代病原菌分析的多重数字平台提供了途径。
图文赏析
Figure 1. Overview of the digital assay for multiplexed detection of pathogens.
Figure2. Digital assay for the detection of three pathogens in real samples.
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RFE00100-250μL Lba Cas12a蛋白
【表达系统】E.coil【性 质】重组蛋白【分子量】143.7 kDa
Lba Cas12a 核酸酶来自毛螺菌科细菌 ND2006（Lachnospiraceae bacteriumND2006），是一种位点特异性 DNA 核酸内切酶，通过长度为41-44个核苷酸的单向导 RNA（gRNA）介导。靶向识别需要一段与目标位点互补的gRNA，以及位于目标序列对侧的 DNA 链上的 5’TTTV PAM（Protospacer Adjacent Motif）序列。Lba Cas12a 核酸酶的切割位点位于 PAM 序列 3´ 端约第18个碱基处，切割产物为5´突出末端。Lba Cas12a 在其蛋白质的 N 端和 C 端都含有猿猴病毒 40（SV40）T抗原核定位序列（NLS）。为N端含 6xHis 标签的融合蛋白。
RFE00200-250 μL CbAgo蛋白
【表达系统】E.coil 【性 质】重组蛋白 【分子量】78.5 kDa
CbAgo核酸内切酶(CbAgo Endonuclease)来源于重组大肠杆菌，含有从丁酸梭菌(Clostridium butyricum)中克隆的 Argonaute (Ago)核酸酶基因，是一种依托引导序列(guide DNA)与靶核酸碱基互补配对，继而特异识别并剪切靶核酸的核酸内切酶。CbAgo核酸内切酶在 5’ 磷酸化的 guide DNA (大于15 nt)引导下精准剪切单链 DNA 底物，剪切位点位于与引导序列互补的5’端开始的第10和11个核苷酸之间剪切不受靶标序列和剪切位点相邻序列限制。为N端含 6xHis 标签的融合蛋白。
RFE00300- 250 μLPfAgo蛋白
【表达系统】E.coil 【性 质】重组蛋白 【分子量】90.4 kDa
PfAgo核酸内切酶(PfAgo Endonuclease)来源于重组大肠杆菌，含有从嗜热古细菌Pyrococcus furiosus中克隆的 Argonaute (Ago)核酸酶基因，是一种基于引导序列(guide DNA)与靶核酸碱基互补配对，继而特异识别并剪切靶核酸的核酸内切酶。PfAgo 利用小的5′-磷酸化的guide DNA (大于15 nt)，在 95°C下精准切割单链和双链 DNA 靶标，剪切位点位于与引导序列互补的5’端开始的第10和11个核苷酸之间剪切不受靶标序列和剪切位点相邻序列限制。为N端含 6xHis 标签的融合蛋白。