Lba Cas12a( Cpf1) 蛋白说明书
【产品名称】LbaCas12a蛋白 【表达系统】E.coil
【性 质】重组蛋白 【分子量】143.7 kDa
【产品信息】：
Lba Cas12a 核酸酶来自毛螺菌科细菌 ND2006（Lachnospiraceae bacteriumND2006），是一种位点特异性 DNA 核酸内切酶，通过长度为41-44个核苷酸的单向导 RNA（gRNA）介导。靶向识别需要一段与目标位点互补的gRNA，以及位于目标序列对侧的 DNA 链上的 5’TTTV PAM（ProtospacerAdjacent Motif）序列。Lba Cas12a 核酸酶的切割位点位于 PAM 序列 3´ 端约第18个碱基处，切割产物为5´突出末端。Lba Cas12a 在其蛋白质的 N 端和 C 端都含有猿猴病毒 40（SV40）T抗原核定位序列（NLS）。
本产品的 Lba Cas12a 核酸酶，克隆自毛螺菌科细菌ND2006（Lachnospiraceae bacterium ND2006），在大肠杆菌中表达，为N端含 6xHis 标签的融合蛋白。
【产品内容】：
名称 | 数量 | 浓度 | 储存温度 |
Lba Cas12a | 1 x 0.02 ml | 100 µM | -20 |
Lba Cas12a Reaction Buffer | 1 x 1 ml | 10 X | -20 |
Lba Cas12a Diluent Buffer | 5 x 1 ml | 1 X | -20 |
【检测靶DNA反应体系】：
1.在室温下按以下顺序组装反应
成分名称 | 数量 |
Nuclease-free water | 20 µl |
Lba Cas12a Reaction Buffer | 3 µl |
300 nM gRNA | 3 µl (30 nM final) |
1 µM Lba Cas12a | 1 µl (30 nM final) |
Total Reaction Volume | 27 µl |
2.在25℃条件下，预孵育10分钟进行预组装
3.加入3µl的30 nM底物DNA（终体积30µl），充分混匀，37℃孵育10分钟
4.使用1%琼脂糖凝胶进行电泳分析。
【反式切割荧光定量反应体系】：
成分名称 | 推荐用量/终浓度 | 优化范围 |
Lba Cas12a Reaction Buffer | 1 X | - |
Reporter (fluorescence） | 120 nM | 40 ~ 160 nM |
gRNA | 50 nM | 40 ~ 160 nM |
Lba Cas12a | 50 nM | 40 ~ 160 nM |
靶DNA或扩增产物 | 适量 | 0-5ul |
Nuclease-free water | 补齐到30 ul | - |
【注意事项】
1.本产品仅供科研使用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
2.请严格按照基因扩增实验室的管理规范进行实验操作，注意防止扩增产物污染。
3.实验结束后，检测过程中所产生的废弃物应按照相关规范进行处理。
4.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。